抗生素作為治療疾病和促進(jìn)生長的有效藥物被廣泛用于醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)、畜牧業(yè)及水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中.抗生素的長期使用甚至是濫用導(dǎo)致大量抗生素被直接排放到環(huán)境中;由于不完全的代謝，有30%~90%的抗生素可以通過人體或動物排泄的方式間接進(jìn)入環(huán)境中.抗生素在生活 廢水、沉積物、地下水、土壤、農(nóng)業(yè)污水、市政污水甚至是飲用水中均有檢出.章強(qiáng)等報道我國地表水中含有濃度較高的68種抗生素.從整個中國地表水的污染情況來看，被檢測到含量最高的抗生素是氟喹諾酮類和磺胺類抗生素，養(yǎng)殖業(yè)廢水和城市污水則是抗生素的最高污染源頭.
氟喹諾酮類(Fluoroquinolones，F(xiàn)Qs)抗生素作為一種全合成的廣譜抗菌藥，能有效抑制革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌，且因為易于口服的特性被廣泛用于醫(yī)院、家備藥品、獸用，占全球抗生素市場份額的17%，其中諾氟沙星(Norfloxacin，NOR)、環(huán)丙沙星(Ciprofloxacin，CIP)生產(chǎn)量最大，約占國內(nèi)氟喹諾酮類抗生素總產(chǎn)量的98%.國內(nèi)外一些水體環(huán)境中均已檢測到有FQs的存在，如：瑞士格里芬湖、北意大利波河、法國塞納河;珠江口、黃河、渤海、海河.
近年來，F(xiàn)Qs被認(rèn)為是環(huán)境中的新興污染物，成為了全球科研界最熱點的研究問題之一.我國FQs研究成果相對還較少，主要原因在于FQs有十余種，對其進(jìn)行分離、鑒定及定量測試方法要求高且分析耗時，費用較高，整體研究難度偏大.
本文選擇對廣東省某一飲用水源地河流中FQs的含量進(jìn)行探討.設(shè)置9個沉積物采樣點，同時向漁民現(xiàn)場購買活體魚樣，對沉積物和魚樣中3種FQs——NOR、CIP及恩諾沙星含量進(jìn)行測定，以期了解FQs在水源地河流沉積物和魚樣中殘留的特征.另一方面，有研究認(rèn)為對FQs的凈化起主要作用的是污泥的吸附作用;FQs有很強(qiáng)烈的吸附能力，能夠強(qiáng)烈吸附在顆粒物和沉積物中.因此，本文對沉積物的有機(jī)質(zhì)含量、總氮、總磷也進(jìn)行了測定，以探查FQs含量與河流沉積物性質(zhì)的相關(guān)性及FQs可能的降解機(jī)制.本研究旨在初查水源保護(hù)區(qū)河流中抗生素的污染水平狀況科學(xué)數(shù)據(jù)、初析沉積物和魚體中FQs殘留的成因;本研究對建議水源保護(hù)區(qū)的管理措施、水域生態(tài)保護(hù)、降低生態(tài)環(huán)境風(fēng)險及保障人類食品安全等方面均具有重要的科學(xué)實踐指導(dǎo)意義.
2 材料和方法
2.1 樣品采集
2014年10月于該飲用水源地河流一級和二級保護(hù)區(qū)內(nèi)設(shè)置9個采樣點，編號為S1~S9，其中S3為支流、其余點位為干流.用彼得遜采泥器采集底泥樣200 g左右，購買5種魚樣：鰱魚、 鯉魚、鳙魚、鳊魚、鱘魚，體重為1~2 kg成體.樣品均24 h內(nèi)帶回實驗室處理.取底泥、魚肉和魚內(nèi)臟各200 g，置于-20 ℃冰箱保存.
2.2 主要試劑及儀器
標(biāo)準(zhǔn)物為CIP、ENR、NOR(色譜純，德國Dr. Ehrenstorfer生產(chǎn)).甲醇制取100 μg · mL-1的FQs標(biāo)準(zhǔn)儲備液和10 μg · mL-1的FQs混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液，-20 ℃保存.乙腈、正己烷、甲醇、甲酸、三乙胺和磷酸均為色譜純，鹽酸、無水硫酸鈉、檸檬酸、乙二胺四乙酸二鈉、磷酸氫二鈉均為分析純.主要儀器有高效液相色譜儀(SPD-20A 紫外-可見檢測器)、氮吹儀(DC-12)、高速冷凍離心機(jī)(3K30)、漩渦混勻儀(XW-80A)、分光光度計(UV-1800).
2.3 沉積樣和魚樣中FQs含量測定
2.3.1 樣品前處理
沉積樣用真空冷凍干燥機(jī)冷凍干燥48 h，粉碎，過10目篩，稱2.0 g于離心管中，加入5 mL Na2EDTA-Mcllvaine 緩沖液(pH=4.0)和5 mL酸化乙腈，漩渦混勻儀提取1 min，超聲波清洗機(jī)振蕩10 min，高速冷凍離心機(jī)(10℃，8000 r · min-1)離心取上清液，重復(fù)操作兩次.上清液用0.45 μm玻璃纖維濾膜過濾，高純水稀釋至250 mL，移至SAX-HLB串聯(lián)柱進(jìn)行固相萃取.洗脫液用氮吹儀吹干，流動相溶解，精確定容至1.0 mL，0.22 μm針頭式過濾器過濾后待測.
魚樣用真空冷凍干燥機(jī)冷凍干燥48 h，粉碎機(jī)粉碎，稱量魚肉和魚內(nèi)臟5.0 g于50 mL離心管中，加入10 g無水硫酸鈉和10 mL酸化乙腈溶液，同上處理.
2.3.2 質(zhì)量保證與質(zhì)量控制
外標(biāo)法確定沉積物樣中目標(biāo)回收率FQs為70%～75%，魚肉中目標(biāo)回收率FQs為70%~83%.每個樣本的平行試驗結(jié)果確定了該方法的可靠性.
2.3.3 色譜定性和定量測定
標(biāo)準(zhǔn)曲線測定：吸取10、20、50、100、200、500、1000、2000 μg · L-1的標(biāo)準(zhǔn)工作液各1.0 mL，測得標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)在0.994~0.999間.樣品均采用高效液相色譜儀(HPLC)分析測定.柱溫：30 ℃;流動相：磷酸緩沖液，乙腈(體積比為82 ∶ 18);流速：1.0 mL · min-1;進(jìn)樣量:20 μL;紫外檢測波長：波長280 nm.3種FQs的檢出限都為0.50 ng · g-1.
2.4 沉積物理化因子測定
OM采用重鉻酸鉀氧化-外加熱法測定(NY/T 1121.6—2006);TN采用凱氏法(GB/T 7173—1987); TP采用過硫酸鹽消化法(LY/T 1232—1999).
2.5 數(shù)據(jù)處理
數(shù)據(jù)用IBM SPSS Statistical 20統(tǒng)計軟件及Excel 2013進(jìn)行分析，采用Person相關(guān)性分析及多元線性回歸分析統(tǒng)計方法，p<0.05 表示顯著相關(guān).
3 結(jié)果
3.1 FQs在沉積物中的分布
對沉積物的FQs色譜圖進(jìn)行定性與定量分析，3種FQs含量結(jié)果見圖 1.
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圖1 9個采樣點沉積物中3種FQs含量比較 |
從圖 1可見，9個采樣點均可檢測到NOR和CIP，S2、S3、S4、S8均未檢測到ENR.各樣點FQs含量均為NOR>CIP>ENR.S9的FQs含量最高，NOR含量最高為248.25 ng · g-1，CIP最高為158.69 ng · g-1，ENR最高為56.81 ng · g-1.
3.2 沉積物理化性質(zhì)
對各采樣點進(jìn)行沉積物理化性質(zhì)的分析，pH的變化范圍在6.60~8.83，平均值為7.27.OM含量、TN含量、TP含量見圖 2.
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圖2 9個采樣點沉積物的有機(jī)質(zhì)、總氮、總磷含量 |
各樣點OM含量變化范圍在0.955%~5.598%，S9測得最大值為4.51%，差異極顯著(p<0.01).各樣點TN含量變化范圍在0.59～1.73 g · kg-1，平均值為1.15 g · kg-1，差異極顯著(p<0.01).各樣點TP含量變化范圍在0.27～3.06 g · kg-1，平均值為0.77 g · kg-1，有顯著差異(p<0.05).
3.3 沉積物FQs與理化性質(zhì)的相關(guān)性及多元回歸分析
對FQs與沉積物性質(zhì)進(jìn)行Person相關(guān)性分析(表 1)，NOR與OM、TP相關(guān)性極顯著，相關(guān)系數(shù)(r)分別為0.948、0.985(p<0.01);CIP與OM、TP相關(guān)性極顯著，r分別為0.935、0.973(p<0.01);ENR與OM、TP相關(guān)性極顯著，r分別為0.956、0.947(p<0.01)，與TN相關(guān)性顯著，r為0.676(p<0.05).NOR、CIP與ENR之間相關(guān)性極顯著，r最小為0.927(p<0.01).
表1 FQs與沉積物化學(xué)性質(zhì)的相關(guān)性分析
對NOR、CIP及NOR含量與OM、TN、TP進(jìn)行多元線性回歸分析(見表 2)，sig均小于0.001，R2在0.947~0.974間，回歸方程有效，回歸模型與實驗得到的數(shù)據(jù)均吻合較好.從多元回歸分析中得出NOR、CIP及NOR含量主要取決于TP的含量(表 2).
表2 多元線性回歸中自變量的標(biāo)準(zhǔn)化系數(shù)(n=9)
對魚樣品的FQs色譜圖進(jìn)行定性與定量分析，得到魚樣中FQs的濃度，見圖 3.
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圖3 5種魚類魚肉中FQs的濃度 |
從圖 3可見，5種魚肉中均檢測出了NOR、CIP、ENR的存在.Cc、Hn和Pp魚肉中檢測到CIP>NOR>ENR，As、Sc魚肉中檢測到NOR>CIP>ENR，5種魚肉中ENR的含量相對低于NOR及CIP的含量.As魚肉中NOR含量最高為106.85 ng · g-1，Pp魚肉CIP含量最高為165.15 ng · g-1.
Pp魚肉與內(nèi)臟中FQs含量比較見圖 4.
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圖4 鳊魚魚肉和內(nèi)臟中FQs的濃度 |
Pp魚內(nèi)臟NOR的含量是魚肉的9.53倍，CIP含量是魚肉的3.21倍，ENR未有檢出.從NOR和CIP含量看，魚內(nèi)臟中的含量高出魚肉.
4 討論
4.1 沉積物中FQs的殘留狀況
將本研究結(jié)果與目前國內(nèi)外河流沉積物中FQs的含量進(jìn)行比較，見表 3.
表3國內(nèi)外河流沉積物中FQs含量比較
從表 3可見，本研究結(jié)果與珠江口FQs含量接近或超出，高于黃河、海河、遼河的FQs含量，顯著高于大亞灣大鵬澳、海陵島及國外3條河流中的FQs含量.分析原因可能為雖然本研究河流為飲用水源保護(hù)區(qū)，但沿河兩岸有大片的淡水養(yǎng)殖魚塘、禽畜養(yǎng)殖業(yè)及處理率僅為40%左右的城鎮(zhèn)生活污水排放共同造成了嚴(yán)重的面源污染，加之該飲用水源河流為感潮河流，潮型為半日潮，潮汐頂托使得污染物在河道中回蕩，因此導(dǎo)致河流中抗生素濃度較高.海河中抗生素來源主要是農(nóng)業(yè)畜牧、魚塘，黃河和遼河中抗生素的來源主要是工業(yè)及市政污水的排放，且3條河流不在市區(qū)中心，污染源相對較少;大亞灣大鵬澳和海陵島位于入?？冢Ｋ鲃有源?，易于污染物的擴(kuò)散;國外對于抗生素污染的監(jiān)管嚴(yán)格，其FQs含量相對較低.
本研究中，沉積樣FQs含量NOR>CIP>ENR.猜測可能是ENR是一種新藥，價格也高于NOR和CIP，因此使用量相對較少.S9點位 FQs含量最高，此點位附近有一城市凈水廠，每日有處理后的污水排放，可能與該凈水廠未能重視削減FQs含量有關(guān);另一方面也反映出城鎮(zhèn)生活污水中也含有較高濃度的FQs抗生素量.
4.2 沉積物理化性質(zhì)對沉積物中FQs歸趨的影響
FQs在體內(nèi)的代謝率<25%，導(dǎo)致大多數(shù)FQs以原型藥物的形式經(jīng)人和動物排泄物、水產(chǎn)養(yǎng)殖飼料等途徑進(jìn)入到環(huán)境中，進(jìn)入水體后會迅速被沉積物中的OM吸附，難以降解.X and er對FQs凈化機(jī)制的研究表明，F(xiàn)Qs在污水中的凈化方式包括生物降解和污泥吸附.Li的研究表明FQs會被污水和沉積物中的污泥強(qiáng)烈吸收，Zhou等的研究表明黃河中FQs的含量與沉積物性質(zhì)粘度、pH相關(guān).
本研究中(表 1和表 2)，3種FQs與OM、TP間呈極顯著正相關(guān).S9點位OM含量最高，沉積物中的OM蘊含物質(zhì)復(fù)雜多元，F(xiàn)Qs進(jìn)入水體后會迅速被吸附，因此S9點位測得的3種FQs也最高，這與張勁強(qiáng)等的研究也相符合.Carrasquillo認(rèn)為FQs有很強(qiáng)烈的吸附固相，能夠強(qiáng)烈吸附在顆粒物和沉積物中(Carrasquillo et al.， 2008)，可見FQs與沉積物間的相互吸附作用強(qiáng)烈，也可以解釋FQs在沉積物中含量高的原因.
S9點位TP含量最高，TP易于吸附在沉積物中，F(xiàn)Qs也易于吸附在顆粒和沉積物中，TP結(jié)構(gòu)復(fù)雜，包含磷物質(zhì)種類豐富，TP結(jié)構(gòu)中的基團(tuán)可能與FQs結(jié)構(gòu)中基團(tuán)相耦合，加強(qiáng)了FQs對于沉積物的吸附作用，因此S9點位測得的3種FQs也最高.但目前這種僅限于推測，尚未進(jìn)行實驗證明，因此，有待加強(qiáng)后續(xù)進(jìn)一步的研究.另一方面，從本文的多元回歸分析中得出NOR、CIP及NOR含量主要取決于TP的含量(表 2)，而沉積物中TP含量較高也反映了底質(zhì)富營養(yǎng)化程度較高，因此，間接指示出在本水體中水體和底質(zhì)富營養(yǎng)化也可能同時會伴存有抗生素的污染問題.
3種FQs間會互相轉(zhuǎn)化，本研究進(jìn)行的相關(guān)性分析也得到3種FQs間顯著相關(guān)(r大于0.927)，說明三者間存在著互相轉(zhuǎn)化的可能，原因可能是沉積物中有大量的真菌、細(xì)菌及各種酶，對FQs有一定的降解作用，但具體降解過程及產(chǎn)物等有待進(jìn)一步探究.
4.3 魚體中FQs的殘留狀況
將本研究結(jié)果與目前國內(nèi)外魚體中FQs的含量進(jìn)行比較，見表 4.
表4 魚肉和內(nèi)臟中FQs含量比較
本研究測得5種魚的魚肉中的FQs含量均顯著高于大亞灣大鵬澳和海陵島中魚的FQs的含量;部分魚類魚肉和內(nèi)臟中NOR、CIP含量高于美國、歐盟的許多國家的殘留標(biāo)準(zhǔn)(殘留限量為30 ng · g-1)，也高于我國農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)NY 5070—2001《無公害食品水產(chǎn)品中漁藥殘留限量》的殘留標(biāo)準(zhǔn)(NOR、CIP殘留限量為50 ng · g-1).分析原因乃為同上，主要是養(yǎng)殖魚塘、禽畜養(yǎng)殖業(yè)、城鎮(zhèn)生活污水及感潮河流的滯留效應(yīng)，導(dǎo)致面源污染嚴(yán)重，水體中可能含有較高的FQs含量.Li的研究表明FQs在可食用的軟體動物內(nèi)臟中性質(zhì)穩(wěn)定(Li et al.， 2012);孫言春的研究也表明FQs在魚體內(nèi)吸收較快，消除較慢，F(xiàn)Qs在魚體內(nèi)富集作用較強(qiáng).魚內(nèi)臟部位為代謝器官，因此，更易積累，造成魚內(nèi)臟中抗生素含量較高的現(xiàn)象.魚體內(nèi)臟中FQs含量多數(shù)情況下高于魚肉中FQs含量，這個結(jié)果與He的研究結(jié)果一致.
魚肉中FQs含量高于沉積物中FQs含量，本研究與Björklund的研究結(jié)果不完全一致.從本研究結(jié)果看，魚肉中FQs含量有其種類特異性，與魚的種類、食性、代謝功能等相關(guān)，可能高出或低于沉積物中FQs的含量.但魚內(nèi)臟中抗生素含量均極大地高于沉積物中FQs含量，可能與魚內(nèi)臟更易積聚和富集FQs有關(guān).
在不同魚體內(nèi)NOR、CIP含量大于ENR含量，一方面可能與ENR的使用量相對較少有關(guān);另一方面，ENR在魚體中會轉(zhuǎn)化成CIP此也可能為一相關(guān)因素.
5 結(jié)論
1)飲用水源地河流的9個樣點沉積物中均能檢測出FQs的殘留，平均含量為諾氟沙星(NOR)>環(huán)丙沙星(CIP)>恩諾沙星(ENR).最大含量分別為：NOR 248.25 ng · g-1，CIP 158.69 ng · g-1，ENR 56.81 ng · g-1.
2)沉積物3種FQs含量與沉積物有機(jī)質(zhì)含量、總磷相關(guān)性顯著，相關(guān)系數(shù)平均為0.946、0.968(p<0.01).說明FQs易于在沉積物有機(jī)質(zhì)中富集且與底質(zhì)富營養(yǎng)程度有一定關(guān)系。
3)5種魚的魚肉中均能檢測出FQs的殘留，鱘魚魚肉NOR含量最高為106.85 ng · g-1，鳊魚魚肉CIP含量最高為165.15 ng · g-1，與FQs易于在魚體中富集有關(guān).鳙魚內(nèi)臟FQs含量是魚肉的3.21~9.53倍;5種魚的魚肉中FQs含量可能高于或低于沉積物中FQs含量均值(49.30 ng · g-1).
4)飲用水源地抗生素污染可能主要來源于面源污染，因此，要加大對飲用水源地的保護(hù)力度，監(jiān)管和嚴(yán)管抗生素在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)、禽畜養(yǎng)殖業(yè)的濫用，深入研究抗生素的毒性水平和毒性效應(yīng)機(jī)制、抗生素的歸趨規(guī)律等，盡快全面建立抗生素在水體、沉積物及水產(chǎn)品中的國家標(biāo)準(zhǔn)，降低抗生素的環(huán)境風(fēng)險，從而切實保障飲用水安全及水產(chǎn)品生態(tài)安全.
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